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简答题有机溶剂沉淀（降低介电常数）
  • 利用酶等蛋白质在有机溶剂中的溶解度不同而使之分离的方法。1）.沉淀机理：降低溶液的介电常数；引起蛋白质脱水2）.常用有机溶剂：丙酮乙醇甲醇，用量一般为酶液体积的2倍左右，终浓度为70%。3）.优缺点：优点：①分辨率比盐析法高②沉淀不需脱盐③溶剂易蒸发，沉淀易离心。缺点：①容易引起蛋白质变性失活②有机溶剂易燃、易爆，对安全要求较高。4）.影响有机溶剂沉淀的因素①温度：低温（0℃）操作。②pH值：尽可能靠近其等电点。③离子强度：采用<0.05mol/L的稀盐溶液，增加蛋白质在有机溶剂中的溶解度，目的：防止蛋白质变性④蛋白质浓度：适当，一般为5〜20mg/ml

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