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- 简答题何谓亲和色层分离法?亲和力的本质是什么?亲和色层中常用的亲和关系有哪几种?
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(1)利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术(Affinitypurification)。亲和层析是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物,使目标产物得到分离纯
化的液相层析法。
(2)亲和力的本质:
1.静电作用:亲和作用分子对的结合部位上带有相反电荷时,产生静电引力。在中性pH下,蛋白质分子上酸性氨基酸残基可带负电荷,碱性氨基酸残基可带正电荷。此外N末端氨基酸的-氨基带正电,C末端氨基酸的羧基带负电。
2.氢键:如果亲和作用分子对的一方分子中含有氧原子或氮原子,结合部位之间可以产生氢键作用,即形成O···H-O或O···H-N。氢键的产生与否受结合部位之间位置关系的严格制约。
3.疏水性相互作用:如果亲和作用分子对的一方分子上含有芳香环或烃基链等疏水基,另一方的结合部位上也含有疏水区,则两者之间可发生疏水性相互作用。
4.配位键:如果亲和作用分子对均与同一金属原子配位,则两者之间可通过金属配位键间接结合。
5.弱共价键:弱共价键是指结合力较弱的可逆共价键。当亲和作用分子对之间满足形成弱共价键的条件时可能形成弱共价键。
具有亲和作用的分子对之间具有“钥匙”和“锁孔”的空间结构关系。
(3)亲和色层中常用的亲和体系:
特异性
亲和作用体系高特异性
抗原----单克隆抗体
荷尔蒙----受体蛋白
核酸----互补碱基链段、核酸结合蛋白
酶----底物、产物、抑制剂群特异性
免疫球蛋白----A蛋白、G蛋白
酶----辅酶
凝集素----糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体
酶、蛋白质----肝素
酶、蛋白质----活性色素(染料)
酶、蛋白质----过度金属离子
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