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简答题Southern杂交一般过程及影响杂交因素。
  • Southern杂交操作步骤:
    (1)用限制性内切酶酶切DNA,经凝胶电泳分离各酶切片段;
    (2)转膜:将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上;
    (3)预杂交:封阻滤膜上非特异性位点;
    (4)杂交:让探针与同源DNA片段特异性结合;
    (5)洗脱:去除非特异性结合的探针;
    (6)自显影检查目的DNA所在的位置。
    Southern杂交影响因子
    1)、目的DNA在总DNA中所占的比例
    2)、探针的大小和标记效率
    3)、转移到滤膜上的DNA量
    4)、探针与靶DNA的同源性
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