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简答题什么是原位杂交技术?其基本过程如何?
  • 根据核酸杂交原理,利用基因探针检出培养板上重组转化体菌落位置的技术。
    基本过程:
    (1)将硝酸纤维素滤膜铺放在生长着转化菌落的平板表面,使其中的质粒DNA转移到滤膜上。
    (2)取出滤膜,作溶菌、碱变性(0.5mol/LNaOH),酸中和(Tris.ClpH7.4)等处理后,转移到一张干的滤纸上,置于室温20~30min,使滤膜干燥。将滤膜夹在两张干的滤纸之间,在真空烤箱中于80℃烘烤2h,固定DNA。
    (3)带有DNA印迹的滤膜同32P标记的适当探针杂交、以检测带有重组质粒(含有被研究的DNA插入片段)的阳性菌落。
    (4)将放射自显影的X光底片同保留下来的原菌落平板对照,从中挑出阳性菌落供作进一步的分析研究
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