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简答题解释PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR?
  • (1)PCR是聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)的英文缩写,是近年来发展起来的一种在体外特异扩增某一目的DNA片段的技术。
    (2)DNA—PCR:以DNA为模板,扩增特定核苷酸序列。主要用于检测特定基因或DNA片段的存在,并常与核酸分子杂交结合,分析检定基因突变。
    (3)RT—PCR:用提取的mRNA或总RNA(含有mRNA)为模板,通过逆转录扩增cDNA。是检测特定基因表达水平的主要方法之一,也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。
    (4)原位PCR:与原位杂交一样,原位PCR也无需提取DNA/RNA,直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞,又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
    (5)定量PCR:PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上,与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板爆光的强弱,用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。
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