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简答题简述一下内切酶和连接酶的作用机制。
  • 内切酶：
    类型I、III：都有甲基化，依赖于ATP，限制内切酶活性。III型酶在识别部位进行切割，很容易从底物上解离。I型酶是随机切割，识别部位不等于切割部位，能产生不同的末端。则I型和III型不同，很难形成稳定的切割末端。
    类型II的特点：识别部位等于切割部位。①在DNA分子双链特异性识别部位切割产生特定的DNA序列。②两个单链断裂部位在DNA分子上的分布通常不是彼此相对的。③断裂的结果形成的DNA片段往往具有互补的单链延伸末端。
    连接酶：
    能够催化双链DNA片段紧靠在一起的3‘—OH末端于5’—P末端之间形成磷酸二脂键，使两末端连接。连接方法：①用DNA连接酶连接具有互补的黏性末端片段。②用T4DNA连接酶将平末端片段连接。③平末端片段加上衔接头或人工合成的连杆使之成为黏性末端后用DNA连接酶连接。

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