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简答题何谓PCR?试述PCR技术的基本原理和影响因素。
  • P.CR是一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术,其原理类似DNA的体内扩增。它包括:PCR包括三个基本过程:①变性(denaturation),即在较高温度(93℃~98℃)使双链模板DNA变性解链成单链DNA,以提供复制的模板;
    ②退火(annealing),即在较低温度(37℃~65℃)使加入的引物与待扩增DNA区域特异性地结合,以提供DNA复制起始的3′―OH;
    ③延伸(extension),即在适当的温度(70℃~75℃)下,DNA聚合酶从特异性结合到DNA模板上的引物3′-OH端开始,根据碱基互补配对原则,按照待扩增区域的核苷酸序列,进行DNA链的延伸,即合成新的DNA分子。这三个过程组成一个循环周期;每个周期合成的产物又可作为下一个周期的模板,如此循环往复,经过n轮循环后,靶DNA的拷贝数理论上呈2n增长。
    影响PCR反应的因素主要有:引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、模板和Mg2+离子,此外,pH、温度、循环次数也会影响PCR反应。
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