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简答题电泳技术中都有哪些问题？解决这些问题的对策是什么？
  • 1）低离子溶液中，不同电荷的蛋白质分子间会发生相互静电作用，增加溶液离子强度可减少这种作用，但会提高电泳时的电流，使产热更多，温度升高又促进蛋白质的扩散，使区带变宽，分辨率下降.因此电泳缓冲液的离子强度必须控制适当；
    2）蛋白质分子所带净电荷主要取决于电泳缓冲液的pH值，应仔细调整和控制电泳缓冲液的pH值，使各组分分子的净电荷数差异加大.但极端pH下蛋白质会变性失活，因此一般控制在pH4.5～9.5之间；
    3）缓冲液的种类，浓度和其他电解质浓度影响蛋白质所带电荷的极性和数量，同时还影响蛋白质分子间的相互作用，因此必须根据分离溶质的不同选择合适的缓冲系统；
    4）表面活性剂（SDS等）强烈破坏蛋白质分子间的非共价作用，使蛋白质分子为表面溶剂分子所包围，阻止了蛋白质之间的相互作用，同时也消除了不同蛋白质固有的电荷差异；
    5）控制电泳介质的有效黏度，包括选择适当的凝胶孔径和添加能增加介质黏度的物质；
    6）电泳过程发热量的控制：
    发热的难题：蛋白质变性；蛋白质区带扩散，分辨率下降。
    对策：
    ①减少发热：降低电流，提高电压；提高传热表面积；提高材质的传热系数；提高冷却系统的温差。
    ②减少扩散：增加缓冲系统或介质的黏度可以减少扩散；在微重力作用下进行电泳。

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