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简答题简述体外克隆基因的操作。
  • （1）从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段；
    （2）在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子；
    （3）感受态细胞的制备—氯化钙法
    （4）转化（transformation）
    感受态细胞与连接产物轻轻混匀，冰浴30min，42℃水浴热激60–90s，快速冰浴2min加液体LB振荡培养，使细胞复苏。
    （5）筛选（screening）
    ①根据重组载体的表型【抗药性（Ampr、Tetr）、其他mark（a-互补筛选）】
    ②根据DNA限制酶的酶谱分析
    ③PCR反应

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