试题详情
简答题大肠杆菌含有2000种以上的蛋白质，为了分离它所表达的一个外源基因的产物并保持它的活性，常有很大困难。但为了某种目的，请根据下列要求写出具体的方法。 ⑴利用溶解度差别进行分离。 ⑵利用蛋白质分子大小进行分离。 ⑶根据不同电荷进行分离。 ⑷以制备有该产物的抗体进行分离。 ⑸产物的浓缩。 ⑹纯度的鉴定。
  • 首先要有一种或几种检测或鉴定外源基因表达产物的方法，然后，在每一次分离纯化后检测表达产物存在哪一个级分中。⑴用硫酸铵或酒精分级沉淀，可根据蛋白质的溶解度的差别进行分离。⑵SDS-PAGE、凝胶过滤、超离心，以及超滤可对分子量不同的蛋白质进行分离。⑶对带电行为不同的蛋白质可以用离子交换层析、等电聚焦、圆盘电泳、毛细管电泳等方法进行分离；但是在使用这一类型的方法时选择溶液的pH值至关重要，因为蛋白质的带电行为和溶液的pH值密切相关。⑷如果具备表达产物的抗体，则可以使用亲和层析或免疫沉淀的方法简洁的分离所需的表达产物。⑸使用吸附量较大的离子交换层析和亲和层析，以及对饱和硫酸铵或聚乙二醇反透析，还有冷冻干燥等方法都可以达到浓缩样品的目的，然而这些方法使用时，都存在着拖延或除去小分子化合物的问题。相比而言，选用合适截流分子量的超滤膜，进行超过滤，往往能同时达到浓缩样品和去盐（包括小分子）的目的。⑹在上述的（2）和（3）这两大类用于分离纯化产物的过程，实际上也有样品纯度鉴定的作用。此外，末端分析、质谱和反相的HPLC层析也都是有效的样品纯度鉴定的方法。但是应注意，样品的纯度是一个相对的概念。

  • 关注下方微信公众号，在线模考后查看

热门试题