试题详情
- 简答题含U模板法定点诱变的基本原理。
- 为了提高诱变效率，1985年，Kunkel对寡核苷酸定点诱变法进行改进，从而建了的含U模板法，它是当今应用最为广泛的一种寡核苷酸定点诱变法。这种方法的基本原理是：在单链DNA模板中用尿嘧啶核苷酸取代胸腺嘧啶核苷酸，这种模板称为含U模板。它可以在体外进行正常定点诱变实验，即通过DNA聚合酶，以此含U单链DNA作为诱变模板在体外延伸寡核苷酸引物，合成杂合双链DNA分子。当双链DNA分子转化至野生型的E.coli细胞中时，由于这种细胞内含尿嘧啶核苷酶，含U的正链DNA受到破坏，而新合成的带有诱变碱基而不含尿嘧啶核苷酸的负链，则不被正常细胞中的尿嘧啶核苷酶所破坏。因此只有带诱变位点的新合成负链可以保存下来。以此负链为模板合成的双链DNA均为突变体，从而大大提高了诱变效率。
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