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- 简答题简述不对称PCR。
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不对称PCR的基本原理是采用不等量的一对引物产生大量的单链DNA。
分为引物浓度不对称PCR和热不对称PCR。结果是产生大量的单链DNA,又避免了在检测时要先出去剩余引物的操作。
引物浓度不对称PCR:两引物的浓度不同,其中浓度低的为限制性引物,起决定性作用,只有当限制性引物耗尽后才会开始大量产生ssDNA;浓度高的为非限制性引物。前10-15循环为双链产物,而后为单链。 常规热不对称PCR(常规引物长度不对称PCR):一对引物的碱基数目与组成不同造成退火温度不同。将限制性引物比非限制性引物的退火温度低至少10度。在刚开始的10~15个循环中,退火温度略低于限制性引物的退火温度,产生双链DNA,以耗尽限制性引物;之后的退火温度便以非限制性引物的退火温度为准,大量产生单链DNA。
交错式热不对称PCR(TAIL-PCR):利用一系列序列特异性的巢式引物和一个短的任意引物引导扩增,一种半特异性的PCR。 关注下方微信公众号,在线模考后查看
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