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简答题基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些？
  • 切、接、转、增、筛（检）

    （1）切——获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择与制备。
    方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物
    从总RNA中分离得到mRNA，再逆转录得到cDNA
    人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）
    （2）接——DNA片段和载体DNA在体外连接，形成重组子。
    （3）转——将重组的DNA引入宿主细胞
    方式：转化——某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的现象；转染——除去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。
    （4）增——培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制、扩增，并将其整合到受体细胞的基因组中。
    （5）筛、检——重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效表达的基因工程菌或细胞。

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