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简答题如何用PCR制备突变DNA分子？
  • 可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可以是碱基替代、插入或者缺失。为了在靶基因特定位点导入突变，在PCR引物设计时，将一条引物设计成为与靶序列互补但在预期位点作碱基替换或缺失。在引物中的诱发突变序列应该位于引物的5′端或在引物中间部位，但绝不能位于3′端。诱变引物的3′区域（至少6～10个碱基）必须与靶DNA完全互补以使引物与模板的退火完全而且Taq酶能延伸引物。
    PCR反应先在低特异性环境下反应5～10个循环以使错配得以发生（即在松弛的温度下），一旦少量的突变模板产生，就可以作为靶序列与引物完全互补。扩增反应的终产物即是所需的含有突变的扩增DNA分子，然后通过克隆和序列分析进行确证。

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