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简答题以某一序列已知的真核生物基因为例，如编码动物激素的基因，使其在E.coli中表达简要说明实验中可能遇到的问题及可能的解决办法。
  • 要使动物中编码激素的基因在E.coli中表达，通常遇到的问题有：
    （1）E.coli的RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子。
    （2）大多数真核基因有内含子，这些内含子在转录后从前体mRNA中被切除而形成成熟mRNA。E.coli细胞没有这样的机制来去除内含子。
    （3）产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解。
    针对上述可能出现的问题，建议在克隆的过程中采取以下措施：
    （1）应将激素的编码序列置于含有核糖体结合位点和起始密码子ATG的细菌强启动子的附近（含有这种序列的载体称表达载体）。
    （2）可以以激素的mRNA为模板用反转录酶合成激素的基因。这种DNA不含内含子可插入到载体中进行克隆。此外，如果蛋白质序列短则可通过化学合成得到该基因。合成的基因应含起始密码ATG、通过该激素蛋白的氨基酸序列推测而来的编码序列，以及1~2个终止密码：ATG——编码序列——TGATAG。
    （3）选用合适的突变型宿主从而防止蛋白酶水解。如果用酵母作为宿主上述许多问题都可以较容易地解决，尤其是现在有既能在大肠杆菌中又能在酵母中复制的穿梭质粒载体

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