试题详情
- 简答题简述革兰氏阳性细菌与阴性细菌细胞壁的成分，结构的差异并阐述革兰氏染色的机理和实验步骤，以及如何避免假阴性和假阳性的发生。
-
染色机理：
G+细菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交练致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。
G-细菌细胞壁外膜中脂质含量很高，肽聚糖层，遇脱色剂乙醇时，以脂质为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞褪成无色，这时再经沙黄等红色染料复染，就使G-细菌呈现红色，而G+细菌仍保持紫色。实验步骤：
1.涂片
2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒，后立即用流水冲洗。
5.复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。
6.镜检：观察染色结果并绘图。
革兰氏染色避免假阴性和假阳性的发生的方法：
1.要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色
2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性
3.脱色不足，革兰氏阴性菌被误染成革兰氏阳性菌；脱色过度，革兰氏阳性菌被误染成革兰氏阴性菌。脱色时间一般为20-30秒。
4.避免用去壁细胞，去壁细胞革兰氏染色均呈阴性反应 关注下方微信公众号，在线模考后查看
热门试题