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简答题Sanger法测序的基本原理是什么?
  • Cambridge的Sanger在1977年发明用双脱氧链终止法测定单链DNA的序列,其基本原理如下:
    ①DNA聚合酶能够用单链DNA作为模板,合成准确的DNA互补链;
    ②该酶能够用2’,3’--双脱氧核苷三磷酸作底物并将其聚合到新生寡核苷酸链的3’-末端,从而终止其延伸反应。
    在DNA测序反应中,加入模板DNA,引物(特异性引物),DNA聚合酶,dA,dT,dG,dC和一种ddNTP。常用Klenow大片段,无5’→3’外切酶活性。
    进行聚合反应,DNA新生链延长,当掺入ddNTP时,聚合反应终止。
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