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简答题获得目的基因的手段有哪些？并简述其工作原理.
  • 目的基因的获取方法有：从基因文库中提取目的基因，使用PCR扩增技术获得目的基因，人工合成。
    ①从基因文库中获取：用限制性内切酶直接获取
    ②鸟枪法：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来。
    ③mRNA逆转录成DNA，“RT-PCR法”
    真核生物的基因含有不表达的内含子，而有时内含子序列很长，因此这种基因难以和载体DNA结合。这种方法是将含有目的基因的mRNA提取出来，然后以mRNA为模板用，用逆转录酶合成cDNA，利用特异性引物PCR钓取目的基因，最后测序验证。
    ④人工合成：根据已知氨基酸序列合成DNA
    根据基因表达产物的氨基酸顺序，搞清楚基因的核苷酸序列，然后先合成一个个含少量核苷酸的DNA片段，再利用碱基对互补关系使它们形成双链DNA片段，再用连接酶把小的双链DNA片段逐个按顺序连接起来，使双链逐渐加长，最后得到一个完整基因。

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