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简答题一般PCR反应中包括几种基本成份?它们的功能分别是什么?
  • 7种基本成分:模板,特异性引物,热稳定DNA聚合酶,脱氧核苷三磷酸(dNTP),二价阳离子,缓冲液及一价阳离子,石蜡油(可忽略)
    模板:待扩增的DNA或RNA,甚至细胞;
    引物:与靶DNA的3’端和5’端特异性结合的寡核苷酸片段,是决定PCR特异性的关键。只有每条引物都与靶DNA特异性结合,才能保证其特异性,引物越长,特异性越高。两段引物间的距离决定了扩增片断的长度;两引物的5’端决定了扩增产物的5’端位置。说明引物决定了扩增片断的长度、位置和结果。
    DNA聚合酶:a.聚合作用,将dNTP中脱氧单核苷酸逐个加到3’-OH末端,b.3’-5’外切酶活性,校正功能,c.5’-3’外切酶活性,切除错配核苷酸;
    石蜡油:维持恒热和整个体系中盐浓度,减少PCR过程中尤其是变性时液体蒸发所造成的产物的丢失。
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