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简答题引物设计的基本原则有哪些？
  • A.引物长度一般在20～24bp（≥16，≤30）：这样长度的引物保证了不易形成杂合体；
    B.（G+C）%含量：两段引物的此数值应相近；在已知模板序列时应与模板的相近。40%-60%；
    C.引物本身不能形成明显的次级结构，如发卡结构；
    D.两引物间不可发生互补（特别是3’端，若不可避免那3’端互补碱基不可超过2个碱基）；
    E.引物3’端配对：引物3’端为DNA聚合酶连上寡核苷酸的地方，因此该端5-6个碱基与DNA的配对必须严格、准确。

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