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简答题简述Taqman探针技术的原理。
  • Taqman探针法是高度特异性的定量PCR技术,其核心是利用Taq酶的5’→3’外切核酸酶活性,切断探针,产生荧光信号,由于探针与模板是特异性结合,所以荧光信号的强弱就代表了模板的数量。在TaqMan探针法的定量PCR反应体系中,包括一对PCR引物和一条探针。探针只与模板特异性的结合,其结合位点在两条引物之间。探针的5’端标记有报告基团,3’端标记有荧光淬灭基团,当探针完整的时候,报告基因所发出的荧光能量被淬灭集团吸收,仪器检测不到信号。随着PCR的进行,Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针,其5’→3’外切核酸酶活性就会将探针切断,报告基团远离淬灭基团,其能量不被吸收,即产生荧光信号。所以,每经过一个PCR循环,荧光信号也和目的片段一样,有一个同步指数增长的过程。信号强度就代表了模板DNA的拷贝数。
    根据其3,端标记的荧光猝灭基团的不同分为:普通的Taqman探针和TaqmanMGB探针。
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