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简答题PCR中使用的DNA聚合酶有哪几种,各具有哪些特点?
  • A.Klenow片段:为DNA聚合酶Ⅰ的片段,有聚合酶活性和3’~5’外切酶活性(最适37℃);
    B.Taq酶:耐热DNA聚合酶,可耐受93~95摄氏度(最适74-75℃),是PCR普及的关键。它避免了不断补加DNA聚合酶的繁琐操作,提高了退火和延伸的温度,减少了非特异性产物和DNA二级结构对PCR的干扰,提高了PCR的特异性、敏感度和产量。它没有3’~5’外切酶活性,无校对功能,点突变较多。依赖镁离子。
    C.Stoffel片段:第二代耐热DNA聚合酶,去除Taq酶的5’~3’外切酶活性,将97.5摄氏度的半衰期提高到20min,而Taq酶只有5min;对复合PCR(2个或以上模板位点的PCR)更有效;
    D.VentTMDNA多聚酶:耐受100摄氏度以上高温达2h;具有校对功能(3’~5’外切酶活性)。
    E.RTth 逆转录酶:有依赖于RNA的耐热DNA聚合酶活性和依赖于DNA的耐热DNA聚合酶活性,这两种活性分别依赖于锰离子和镁离子。
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