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简答题如何筛选重组体?
  • (1)抗药性筛选
    这是利用载体DNA上组装的抗药性选择标记进行筛选的方法。
    常用的抗生素筛选剂:氨苄青霉素(ampicillin,Ap或Amp);氯霉素(chloramphenicol,Cm或Cmp);卡那霉素(kanamycin,Kn或Kan);四环素(tetracymic,Tc或Tet);链霉素(strentomycin,Sm或Str)。
    (2)插入失活筛选法
    检测克隆载体携带有外源DNA的通常方法是插入失活。经过抗药性筛选获得的大量转化子中既包含所需要的重组子,也包含非重组子。为了进一步筛选出重组子,可利用质粒载体的抗药性进行再次筛选。
    (3)插入表达筛选法
    与插入失活相反,插入表达法是外源目的基因插入特定载体后,能激活用于筛选操作的标记基因的表达,由此进行转化子的筛选。设计载体时,在筛选标记基因前面连接一段具有抑制作用的负调控序列,插入外源DNA将使该负调控序列失活,其下游的筛选标记基因才能表达。
    (4)环丝氨酸筛选
    这种筛选方法只使用于抗四环素的基因插入失活的重组克隆筛选。
    (5)显色反应筛选法
    显色反应可以在平板上或膜上直接显示出重组克隆,不仅方便而且灵敏。
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