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简答题论述常用的固定化方法主要有哪些?它们都有哪些优缺点?
  • 常用的细胞固定化的方法主要有吸附、共价贴附、离子/共价交联、包埋和微囊化。
    ㈠吸附:
    定义:是指用固体吸附剂将细胞吸附在其表面而使细胞固定化的方法。
    优点:操作简便、条件温和,是动物细胞固定化中最早研究使用的方法。
    缺点:载体的负荷能力低,细胞容易脱落,由于细胞吸附于支持物表面,因此容易受到机械剪切力的作用。
    ㈡共价贴附
    定义:利用共价键将动物细胞与结合的固定化方法
    优点:此法可减少细胞的泄露,
    缺点:须引入化学试剂,对细胞活性有影响,且因贴附而导致扩散限制小,细胞得不到保护。
    ㈢离子/共价交联法
    定义:如果对细胞用交联剂处理,则在细胞之间形成交联桥,使之絮结。
    缺点:交联试剂会使一些细胞死亡,也会产生扩散限制。
    ㈣包埋法
    定义:将细胞包埋在多孔载体内部制成固定化细胞的方法。
    优点:步骤简单,条件温和,负荷量大,细胞泄露少,抗机械剪切。
    缺点:扩散限制,并非所有细胞都处于最佳基质浓度,且大分子机制不能渗透到高聚物网格内部。一般适用于非贴壁依赖性细胞的固定化。
    ㈤微囊法
    是用一层亲水的半透膜将细胞包围在珠状的微囊里,细胞不能逸出,但小分子物质及营养物质可自由出入半透膜;囊内是种微小培养环境,与液体培养相似,能保护细胞少受损伤,故细胞生长好,密度高。
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