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简答题蛋白质含量/浓度测定方法有哪些？各有什么特点？
  • 蛋白质含量（浓度）测定，是生化检测中的基本内容，常见的测定方法有：凯氏定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。考马斯亮蓝法（Bradford法）。
    1）凯氏定氮灵敏度低，适用于0.2~1.0mg氮，误差为±2％费时8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长。
    2）双缩脲法（Biuret法）灵敏度低1～20mg中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2+紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似。
    3）紫外吸收法较为灵敏50～100μg快速5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶。
    4）Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高～5μg慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化。
    5）考马斯亮蓝法（Bradford法）灵敏度最高1～5μg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液。

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