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简答题质粒DNA提取后如何检测其提取质量？
  • 质粒DNA鉴定常用琼脂糖凝胶电泳法。它是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性，其孔隙大小取决于琼脂糖的浓度。在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA主要是利用分子筛效应，其迁移速度与分子量的对数值成反比关系。此外，琼脂糖凝胶的浓度也会影响特定大小的线状DNA的迁移率，因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。染料溴化乙锭（EB）能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA形成复合物，在紫外光的照射下发射荧光，且其发射的荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可以检测10ng以上的DNA。质粒DNA有三种构型，其中超螺旋的电泳迁移率最快。
    质粒DNA的浓度测定主要有紫外光谱分析法与EB荧光分析法两种。其中紫外光谱分析法主要是根据DNA在260nm处有特异的紫外吸收峰，且其光吸收的强度与核酸的浓度成正比这一特性来推算DNA的浓度。据计算，测定该波长下DNA溶液的OD值，当OD260=1时，双链DNA含量约为50μg/ml，据此可计算出测定溶液中DNA的含量。由于蛋白质的吸收峰在280nm处，在测定DNA含量时，还常计算OD260/OD280之值，如该值为1.8—2.0时，认为已达到较高的纯度，如低于此值，表明其内含杂质较多，可能影响酶切反应。

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