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简答题常用来构建文库使用的载体系统有哪些?各有什么特点?
  • 1.噬菌体载体系统:构建的库容量最大(适于全长cDNA的克隆),转染效率最高,有较好的质量控制指标(通过对转染细胞的表现鉴定,如蓝白斑分析),适合于cDNA文库的长期保持。
    缺点:采用的文库筛选方法有限,文库中许多的cDNA片段在宿主细胞中常常无法获得功能性表达。
    2.质粒载体系统:体外操作方便,在载体本身的设计上有很大的可塑性,可对cDNA文库进行功能性筛选缺点,插入片段的载体容量小,因此文库中含有全长cDNA的克隆比例少;文库的库容量较小,质粒文库需要以活的转化菌形式保存和扩增,保存条件严格,不适于长期保存。
    3.噬菌粒载体系统:功能性筛选,缺点同“质粒载体”,cDNA文库功能筛选的重要方法
    4.哺乳类细胞表达载体:侵染的细胞增广;对细胞侵染率高;转染进宿主细胞的重组病毒基因能高频地整合到宿主细胞基因组中。
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