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- 简答题简述3’-RACE。
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3’RACE用于mRNA已知序列下游（即3’端）未知序列的扩增，可分为两步。
（1）以与polyA尾巴互补的序列为引物， 反转录获得3’末端第一链cDNA序列。
（2）以靠近第一链cDNA3’端的序列为特异引物合成cDNA第二链，再PCR扩增。
A.反转录获得3’末端第一链cDNA：3’末端本身具有PolyA，可以与引物结合。引物也同样具有oligo（dT），但这种引物在5’端有OP（Outer Primer）和IP（Inner Primer）的特殊结构，便于为以后的两轮PCR提供引物；在3’端加入一个锚定核苷酸，可以使反转录在紧接着PolyA的交界处进行，这样可以有效减少同聚物的产生。
B.第一链cDNA3’端的扩增：设计两种引物——GSOP和GSIP。由于cDNA已含有外源性OP和IP序列，故可以用来自目的基因的GSOP和来自锚定序列的外源性OP进行第一轮扩增，用GSIP和IP进行第二轮扩增，以此增强特异性。 关注下方微信公众号，在线模考后查看
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