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简答题CHO培养生产rhEPO的基本工艺过程及其控制点是什么，为什么？
  • ①复苏：液氮冻存的CHO细胞系在37℃中水浴快速融化。无菌离心，弃上清。
    ②培养：加适量DMEM（10%小牛血清），37℃、CO2培养箱培养，连续传三代。
    ③消化：用胰蛋白酶消化贴壁细胞后，制成细胞浓度约为2.5×106个/ml。用于接种。
    ④反应器灭菌：加纤维素载体片及pH7.0的PBS缓冲液，高压灭菌。
    ⑤接种：排出PBS缓冲液，加DMEM培养基（含10％血清），接入种子细胞。
    ⑥贴壁培养：pH7，<50r/min，37℃，DO50-80%。
    ⑦扩增培养：80－100r/min。pH7，37℃。
    ⑧灌流培养：控制温度、DO、pH值等培养条件，进行无血清培养基连续培养。
    ⑨收获培养物：连续收获，4℃－8℃保存。
    控制点：
    ①搅拌控制：接种后，搅拌速度缓慢，使细胞贴附于载体上，随着细胞数量的增加逐渐提高搅拌速度。
    ②温度控制：较为严格，恒定37℃
    ③pH值控制：7.2-7.4，输入CO2和碳酸氢盐溶液维持其恒定。
    ④溶解氧控制：在50-80％的范围内，通入氧气、空气、氢气或氮气的比例混合气体。
    ⑤葡萄糖控制：流加补料
    ⑥代谢废物控制：监测铵、乳酸盐类等，维持较低浓度，减少对细胞损害。

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