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简答题在微生物细胞破碎技术中,机械法与非机械法有什么不同?
  • 破碎方式分为机械法与非机械法。机械法包括以固体剪切力作用为机理的珠磨法与压榨法,以液体剪切力为作用机理的高压匀浆和超声波破碎法。非机械法包括干燥处理手段和以溶胞作用为机理的酶溶法、化学法、物理法。二者相比各有特点,同时也有自身局限性,以下是二者之间的不同。
    (1)破碎机理:机械法应用高压或研磨剂,使细胞悬液在加速碰撞下迅速破碎,应用剪切作用,相对剧烈的切碎细胞,而非机械法运用化学试剂对细胞壁和膜的作用,改变通透性,以溶解局部壁膜的温和方式。
    (2)碎片大小:机械法通过高压碰撞,剪切磨损已将细胞打成细小碎片,以至于匀浆中成分复杂,不易分离胞内物。非机械法只作用于细胞表面,所以在细胞大小方面,碎片较大,外形较完整,碎片少,易于初步分离。
    (3)内含物释放:机械法可以将内含物全部释放,而非机械法部分释放,由微生物结构特性以及不同细胞对化学渗透剂的不同作用所致,破碎难易度不同,对试剂作用不同。
    (4)黏度:核酸释放的多少影响到黏度。机械法释放的核酸多,黏度高,非机械法基本不破坏细胞核,因此核酸释放少,浆液黏度低,便于进一步提取。
    (5)时间效率:机械法作用时间短,效率高。而非机械法作用时间长,效率低,一般胞内物质释放率不超过百分之五十,而处理时间则长达2小时以上,所以往往需要添加还原剂保护,以防止活性损失太多,通常为提高收率而采用较高实际浓度,试剂用量大,成本高,也给后处理带来不便。
    (6)设备:机械法需用专用设备如高压匀浆器,珠磨机。因此在工业生产上应用较广,而非机械法不需用专用设备,只须用化学试剂,控制好温度等条件既可。
    (7)通用性:机械法通用性较强,除对仪器有堵塞作用如团状或丝状真菌以及较小的革兰阳性菌不适用高压匀浆器之外,一般大部分微生物细胞可采取机械法处理,而非机械法通用性差,某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。
    (8)经济方面:机械法只须用特定的仪器,控制条件方便容易变化不大,所以成本低。非机械法所用相应的化学试剂,培养时间长,成本高。
    (9)应用范围:机械法适用于实验室,工业范围,非机械法适用于实验室范围。
    机械法高效,廉价,简单,而得以工业化应用,但敏感性物质失活问题,碎片去除以及杂蛋白太多等问题仍要解决。
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