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简答题分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些?
  • (1)反应温度:
    连接缺口的温度:37度
    连接粘性末端的最佳温度:4~15度
    (2)T4DNA连接酶的用量:
    平末端DNA分子的连接反应中,最适1~2个单位。
    粘性末端DNA片断之间的连接,酶浓度0.1个单位
    ATP的用量10μmol-1mmol/L之间
    (3)提高外源片断与载体的浓度的比值(10~20倍)
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