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简答题从细胞破碎到蛋白质复性可以走不同的工艺路线。此工艺路线主要有哪三种？分别有哪些特点？
  • 1）机械破碎（高压匀浆、高速珠磨法）-离心法提取出包涵体-加变性剂溶解-除去变性剂。
    此路线利用了包涵体与细胞碎片的密度差，用离心法将包涵体与细胞碎片和可溶性蛋白质分开，获得了干净的包涵体，在对包涵体溶解复性。
    这样首先就摆脱了大量的杂蛋白、核酸、热原、内毒素等杂质，使后面的分离纯化简单化了。
    缺点：要经过几次离心才能除去大部分细胞碎片，加工时间较长。
    2）机械破碎-膜分离除可溶性蛋白-变性剂溶解包涵体-除变性剂复性。
    此路线应用了膜分离技术，用微孔膜除去可溶性蛋白质，但细胞碎片却和包涵体一起被膜挡住，难以分开；而且膜的堵塞和浓差极化常常导致可溶性蛋白质的直流，因此这条路线的问题较多。
    优点：膜分离是封闭式操作，不污染环境也不受环境污染，能量消耗也比离心法少。
    3）化学破碎（加变性剂），离心除细胞碎片-除变性剂复性。
    此路线是用化学法破菌，所采用的试剂既可以破菌有可以溶解包涵体，将两道工序合为一道，节省了设备和时间，比前两者更适合于实验室操作。
    缺点：所有的可溶性杂质都没有被除去，混杂在产物中间，给后分离带来困难。

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