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简答题利用酶合成法制备三氮唑核苷时如何防止可逆反应影响收率？ 
  • 应用产气肠杆菌AJ11125产生的嘌呤核苷磷酸化酶催化，讲核糖-1-磷酸与TCA反应、直接生成三氮唑核苷。在两步反应中采用同一种嘌呤核苷磷酸化酶，由于降解产物次黄嘌呤对酶比TCA具有更大的亲和性，致使次黄嘌呤再与核糖-1-磷酸缩合，可逆反应促使总收率仅20%左右，这是采用菌种所产生的酶的局促性。为了解决这一问题，设计了两种直接生产的方法：
    （1）采用前段与后段由两个不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶，后段使用嘌呤核苷磷酸化酶，而且已经筛选到一株同时产生这两种酶的菌株。
    使用尿苷或胞苷为底物时，产生三氮唑核苷的优良菌种产气肠杆菌，菌株经24h培养，收集菌株集体后在60℃反应96h，可获得较高产率到饿三氮唑核苷。
    （2）前段及后段反应都利用嘌呤核苷磷酸化酶，但注意到使用的底物含有溶解度很小的嘌呤碱基的核苷或者生成的降解产物在后阶段反应时它对酶的亲和力比TCA低得多。根据这些原则，使用尿苷、肌苷、黄苷为底物，优秀的菌株是乙酰短杆菌AJ1442，将该菌24h培养的湿细胞加入底物，在反应液中达100mg/mL，60℃，96h，可获得较高产率到饿三氮唑核苷。

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