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简答题噬菌体的检查根据什么原理?试述单层琼脂平板法检查噬菌体和双层琼脂平板法测定噬菌体效价的方法及操作过程。
  • 噬菌体侵染敏感寄主细胞后,释放出子代噬菌体,通过琼脂再扩散到周围的细胞中,继续侵染引起更多细胞裂解,从而在平板上形成一个个肉眼可见的透亮无菌近圆形的空斑,称为噬菌斑,它是噬菌体存在的一种特性标志,由此检出噬菌体的存在。单层琼脂法将指示菌液和经适当稀释的噬检液与单层培养基一起倾注平板。充分混匀并凝固后,置适温下培养约12h,观察计数。此法较简便,可用于噬菌体的效价测定。但若培养基较厚易产生上下噬菌斑重叠现象,影响计数的准确性。双层琼脂法一般采用的效价测定方法。双层琼脂法是先用含2%琼脂的固体培养基倾注底层平板,再在其上倾注一薄层半固体上层培养基,上层培养基事先已与对数期指示菌液和噬检液混合均匀。经适温培养后,便可观察计数。此法的优点是所形成的全部噬菌斑基本处于同一平面上,因而各斑大小均匀,边缘清晰易见,不发生上下噬菌斑重叠现象。此外,因上层半固体培养基较稀,使形成的噬菌斑较大,也有利于计数。因此,该法是一种被普遍采用并能精确测定效价的方法。
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