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简答题种保藏的原理是什么？试述冷冻干燥保藏法的步骤和操作注意事项。
  • （1）原理：根据微生物生理、生化的特点，通过创造适宜条件，使微生物的代谢处于不活泼和生长繁殖受抑制的休眠状态，以减少菌种变异、退化、死亡。如，低温、干燥、缺氧、营养缺乏。
    （2）步骤：
    ①准备安瓿管：安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安瓿中，管口塞上棉花，灭菌备用。
    ②制备保护剂：用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。
    ③菌悬液制备及分装：将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅拌使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装置约为0.9mL（一般装入量为安瓿管球部体积的1/3）。
    ④预冻：将分装好的安瓿管在-30以下进行预冻1h。
    ⑤真空干燥：预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。
    ⑥封管：封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至1.333Pa后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。
    ⑦保藏：做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。
    ⑧质量检查：检查项目有，水份（5％以下）、真空度、杂菌污染情况、存活率、形态变异、生产能力。
    ⑨活化：如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。再用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。
    操作注意事项：
    ①脱脂牛奶的脱脂要完全，灭菌条件合适；
    ②要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长；
    ③予冻要彻底（-30℃以下）；
    ④注意真空度（10-2托以下）；
    ⑤熔封时注意，火焰集中，不使菌受热；
    ⑥注意保藏温度。

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