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简答题制备固定化酶常用的方法有哪些?各有何优缺点?
  • (一)包埋法:将酶分子包埋在凝胶的网眼中或乍透性的聚合物膜腔中,以达到固定化酶的方法叫包埋法。
    包埋法一般不需要与酶蛋白的氨基酸残基进行结合反应,很少改变酶的高级结构,酶活回收率较高,但是在包埋时发生化学聚合反应,酶容易失活包埋法只适合作用于小分子底物和产物的酶,对于那些作用于大分子底物和产物的两是不适合的。
    (二)吸附法:物理吸附:酶活力损失少,与载体相互作用力弱,易脱落。
    离子吸附:操作简单,条件温和,酶活回收率高;易受缓冲液的影响。在离子强度高的溶液中易脱落。
    (三)共价偶联法:载体与酶以共价键结合的固定化方法,不易脱落,连续使用时间长;操作复杂,酶活回收率不高;影响底物专一性,影响催化活性。
    (四)非共价结合法:结晶法:酶浓度高,对于活力低的酶更具有优越性。分散法:对酶进行分离再利用。
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