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简答题多聚酶链式反应的基本原理?过程有哪些?
  • 基本原理:
    (1)在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下,利用DNA聚合酶催化合成反应,体外扩增特异DNA片段。
    (2)能够指导特定DNA序列的合成。
    (3)使特定DNA区段得到了迅速大量的扩增。
    反应过程:
    (1)变性。通过加热至一定温度使双链DNA两链间的氢键断裂,DNA双链离解形成两条DNA单链。
    (2)复性(退火)。当反应体系温度突然降低时,由于模板DNA分子的结构比引物DNA分子复杂得多,而且在反应体系中引物的量大大多于模板,因此引物和与其互补的模板配对形成局部杂交双链,而变性后离解形成的两条模板DNA单链之间互补配对的机会则较少。
    (3)延伸。在4种脱氧核糖核苷三磷酸底物、Mg2+等存在的条件下,TaqDNA聚合酶以模板-引物杂交体分别为模板和引物催化DNA链沿5’→3’方向合成延伸。每个循环的扩增产物作为下一循环的模板。
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