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简答题什么是PCR扩增法，其原理、操作步骤、反应过程和意义？
  • PCR技术是一种用于体外扩增位于两端已知序列之间的DNA区段的分子生物学技术。
    PCR原理：PCR技术的实质为体内DNA复制的体外模拟。即使双链DNA热变性而分开成为单链DNA，退火后在低温下，两个与模板互补的引物与单链DNA配对结合，再在中温下利用TAGDNA聚合酶的聚合活性和热稳定性进行聚合（延伸）反应。每经过一次变性、退火和延伸为一个循环，所扩增的特定DNA序列数是按几何指数增长。
    PCR技术操作步骤为：
    ①反复将目的基因片段进行热变性处理，令其双股链解开；
    ②进行反链杂交、退火、形成单链；
    ③用TagDNA聚合酶沿DNA链全程合成出两股双链DNA分子；
    ④然后开始第二个反应周期。每个反应周期，特异性目的基因可扩增一倍。用n代表反应周期数，则特异性DNA目的基因片段便按2^n指数扩增下去，一直扩增至所需数量为止。
    PCR反应过程：
    ①DNA的变性：DNA双链在加热或碱性条件下，双链的氢键断裂为单链DNA，一般解链温度为85-95℃；
    ②引物与单链DNA退火结合：单链DNA在温度逐渐降低时，重新与其互补的引物或另一条单链结合形成双链，称为退火；
    ③引物延伸：以目标DNA为模板，以引物为固定起点，以四种脱氧核苷三磷酸为底物在DNA聚合酶的作用下，由5’端向3’端的方向进行DNA复制。
    意义：PCR技术能在短时间内大量扩增目的基因DNA片段，且全部操作已实现自动化，这一技术不仅广泛应用于基因重组操作中的基因扩增及其检出，而且在研究火花的致癌基因、等会基因序列变异，以及分子生物学、医学、食品、农业、化工的许多领域中都得到广泛的应用。

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