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简答题叙述蛋白质工程的改造策略与方法。
  • 策略：
    （1）疏水性AA出现在Pr的活性中心区域
    （2）定点突变时注意保守AA残基
    （3）保留潜在的N糖基化位点（Asn-X-Ser/Thr-X-Pro）中的Asn、Ser或Thr
    （4）含内含子？的序列，可删除某一外显子？或外显子组合，因单个外显子通常编码独立折叠的结构域？，删去该结构域可能不影响Pr其余部分的正确折叠
    （5）构建两个同源Pr的嵌合体？时，尽量使接合部位处在有相同或相近功能的AA序列中；两个非同源Pr组成嵌合体，应使接合部分尽量位于所预测结构边缘。
    （6）目的蛋白三维结构未知时，在目的序列中随机插入六聚体接头鉴定功能性结构域。插入接头后，在原Pr序列中加两个AA，对Pr整体功能的破坏轻。
    （7）缺失突变时，避免直接用天然的限制性酶切位点删除。以免破坏正确的ORF？，或得到的缺失突变体边界不能落在适当的位置，使Pr不能正确折叠。
    改造方法按改造的规模和程度分：
    ①初级改造个别AA的改变和一整段AA序列的删除、置换或插入；
    ②高级改造Pr分子剪裁，如结构域的拼接；
    ③从头设计合成新型Pr。

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