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简答题什么是基因组文库法?其构建方法是怎样的?
  • 采用限制性酶将基因组DNA切成片段,每一DNA片段都与一个载体分子拼接成重组DNA。将所有的重组DNA分子都引入宿主细胞并进行扩增,得到分子克隆的混合体。简单的说就是汇集某一基因组所有DNA序列的重组DNA群体。以λ噬菌体和柯斯质粒为载体构建。
    其具体的构建方法:
    (1)从生物体提取大片断的基因组DNA;
    (2)用适当的限制性内切酶(常为4碱基识别位点)进行部分酶切或超声波打断基因组DNA;
    (3)在琼脂凝胶电泳上或蔗糖梯度离心筛选适当长度的DNA片断(根据载体的要求);
    (4)载体的酶切、回收;
    (5)将处理好的基因组DNA片断与载体连接;
    (6)将重组子导入宿主细胞;
    (7)文库的鉴定、收集、保存。
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